Esta técnica es muy usada en los laboratorios, sobre todo en los de biología molecular, debido que se utiliza en procedimientos importantes como: separación, análisis y purificación de ARN, ADN, o proteínas, ácidos nucleicos, este proceso se realiza debido a que la mayoría de las biomoléculas tienen una carga eléctrica donde su magnitud depende del pH del medio en el que se encuentran; a causa de esto las biomoléculas se desplazan cuando se someten a un campo eléctrico hacia el polo de carga opuesta al de la molécula.
Su funcionamiento es un proceso sencillo, separa las moléculas según su tamaño y carga eléctrica, para esto se utiliza una corriente eléctrica que impulsa a desplazar las moléculas a través de un gel o de otra matriz., luego los poros del gel actúan como un tamiz, permitiendo que las moléculas más pequeñas se muevan más rápido que las moléculas más grandes, para conocer el tamaño de las moléculas de una muestra, se comparan con los estándares de tamaños establecidos que se separan en el mismo gel.
Como ocurre de migración de moléculas en la electroforesis
En el caso de las proteínas que pueden tener una carga positiva o negativa, suelen ser de carga neutra, para la migración de moléculas se realiza pretratamiento con detergentes, como el dodecilsulfato de sodio (SDS), que les confiere carga negativa; con ello se homogeneizan las proteínas de la muestra y todas migrarán hacia el polo positivo; sólo se separarán por tamaño.
Ahora por el lado de los ácidos nucleicos solo tienen una carga negativa, debido a su esqueleto de fosfatos, en su lugar la electroforesis, hace que los ácidos nucleicos migraran hacia el polo positivo, llamado ánodo. Esta técnica de migración es lo que denominamos el principio de la electroforesis, donde se produce de forma proporcional el desplazamiento de las moléculas a través de un gel u otro tipo de matriz porosa, usando los parámetros de peso molecular o tamaño; movimiento generado por el campo eléctrico.
Principios de la electroforesis
Este principio se basa en las técnicas usadas para la migración de moléculas, este proceso se realiza en una especie de caja la cual tiene una carga con un extremo positivo en un lado y una carga negativa en el otro lado, cuando se coloca dentro una molécula cargada dentro, esta se desplaza siguiendo un patrón especifico, es decir, si las moléculas tienen carga negativa van a migrar a la carga positiva, pero por el contrario si esta cargada positivamente pues se desplazara al lado negativo.
Cuando se analizan las proteínas en un gel se toma la proteína completa para ver lo grande que es, cumpliendo el siguiente principio que cuanto más corta, más migran en el gel, de modo que las proteínas pequeñas terminarán en la parte inferior del gel, porque han ido más lejos, y las más grandes terminarán quedándose en la parte superior. Pero en el caso del ADN, trabajamos con una molécula muy larga, por lo que los científicos optan por cortar el ADN con cosas como las enzimas de restricción, haciendo el ADN más manejables en pedazos más pequeños, luego según el tamaño que sean, migran más o menos por el gel y terminan más arriba o más abajo.
Elementos necesarios para una electroforesis
Para realizar una electroforesis se requiere de una serie de elementos, como: cámara de electroforesis, peines para pocillos, gel, transiluminador, fuente de poder, buffer de corrimiento, marcador de peso molecular, buffer de carga; es importante resaltar que las cámaras de electroforesis vertical el polo positivo está ubicado en la parte inferior de la cámara y en las horizontales, en uno de los extremos. En ambos tipos de cámaras el polo positivo se identifica con color rojo y el negativo con negro.
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